PCR反应体系

标准的PCR反应体系：　　　　　　 10×扩增缓冲液　 10ul　　　　　　 4种dNTP混合物　各200umol/L　　　　　　引物　　　　　各10～100pmol　　　　　　　模板DNA 　　　　0.1～2ug　　　　　　　Taq DNA聚合酶　 2.5u　　　　　　　 Mg2 　　　　　　 1.5mmol/L　　　　　　加双或三蒸水至　100ul　　PCR反应五要素：参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2 　　引物：引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列，就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则：①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。②引物扩增跨度：以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。③引物碱基：G C含量以40-60%为宜，G C太少扩增效果不佳，G C过多易出现非特异条带。ATGC最好随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶　核苷酸的成串排列。④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3"端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。⑤引物3"端的碱基，特别是最末及倒数第二个碱
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