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移入无菌操作台内。依据细胞种类和浓度，于无菌操作台内取10ml培养基加至T25或T75 flask中。取出已解冻之细胞悬浮液，缓缓加入T25或T75flask内之培养基，混合均匀，放入37℃，5%CO2培养箱培养。（3）对绝大多数细胞而言，1%以下之冷冻保护剂DMSO，不会对细胞之贴附或活化有不良影响，不需立刻由解冻细胞中去除，待第二天确定细胞生长或贴附良好后再去除即可。惟对极少数因对DMSO敏感或会造成细胞分化之细胞，需立即去除DMSO者，则可将解冻后之细胞悬浮液放入5～10ml培养基中，离心300g(约1000rpm)，5分钟，小心移去上清液，加入适量新鲜培养基，将细胞均匀混合后，转移至培养瓶中，再放入37℃，5%CO2培养箱培养。
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