采用3H-TdR掺入率测定淋巴细胞增殖功能

原理：T细胞、B细胞表面具有识别抗原的受体和有丝分裂原受体，在特异性抗原刺激下可使相应淋巴细胞克隆发生增殖。植物血凝素（PHA）、刀豆蛋白A（ConA），抗CD２、抗CD３ McAb作为多克隆刺激剂可选择性地刺激T细胞增殖；而抗IgM、含葡萄球菌A蛋白的菌体（SAC）、脂多糖（LPS，对小鼠有作用）则刺激B细胞发生增殖；美洲商陆（PWM）、肿瘤刺激剂PMA对T、B细胞的增殖均有刺激作用。最近发现，integrin家族中VLA组中某些受体与相应配体结合后也能活化T细胞。根据形态学或氚标记胸腺嘧啶核苷（３H-TdR）掺入率测定T细胞的增殖水平。一、仪器、材料及试剂1、Beckman LS-9800型液体闪烁计数仪，或Beckman LS 6500型液体闪烁计数仪2、多头细胞收集仪3、3H-TdR（比活性为2Mci~10Mci/mg分子）。3H-TdR工作液：将1Mci/ml溶液以生理盐水稀释成100μci/ml，于4℃保存备用。临用时再用培养液稀释成10μci/ml溶液。３H-TdR一般临用时稀释。4、闪烁液：PPO（2，5-二苯基恶唑）、POPOP（1，4-双-2-15-苯基恶唑苯）Sigma公司。ppo5.0g popop0.1～0.3g 加二甲苯或甲苯至1L；POPOP加入少量二甲苯在37℃水浴上溶解后，再加PPO，然后补足二甲苯。配好的闪烁液需要闭光。闪烁液
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