MSC原代培养与传代培养

准备工作（1）试管、试管架、滴管、吸管、小鼠固定架、玻璃瓶、玻璃皿、烧杯、橡皮头、剪刀、镊子、纱布、棉球、酒精灯、滴管、移液器、细胞计数器、生理盐水、PBS、双抗（青连霉素）、75%酒精、95%酒精、培养瓶（50ml，260ml）。（2）BALB/C小鼠（4～5周龄，18～22g，雌雄不拘）、胎牛血清（灭活）、DMEM-LG培养液（美国GIBCO）（3）针头与注射器：4.5号、7号针头（冲小鼠股骨、胫骨和肱骨骨髓，制单细胞悬液）。实验前准备（1）实验室消毒，隔离衣消毒，小鼠固定架消毒。配10%FBS培养液，加双抗（内含青霉素、链霉素各100μg/ml）。（2）用75% 酒精擦拭无菌操作台面，取各种已消毒的培养用品置于超净台面，无菌室及超净台用紫外灯照射30～60 分钟灭菌。（3）开始工作前先洗手、75%酒精擦拭手至肘部。穿隔离衣，戴手套。用70% 酒精擦拭无菌操作台面，并开启无菌操作台风机运转10 分钟后，才可开始实验操作。点燃酒精灯，安装吸管帽。实验步骤（1）Balb C纯系小鼠脱臼处死后，75%乙醇浸泡5min后，在无菌操作台上无菌条件下分离双侧股骨及胫骨，在含生理盐水的50mm2玻璃平皿中去除股骨周围肌肉组织，剪去包括骺板在内的两侧骺端，用10ml注射器（配4.5号针头）抽取适量含10%FBS的完全培养基冲洗骨髓腔，将骨髓冲入培养瓶。依次用7号针头和4.5号针头
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