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    Real time PCR试剂质量的评价

    临床使用PCR定量检测核酸,由于手工操作多、影响因素多,质量控制比较困难,在增强操作能力和仪器设备的基础上,选择好的PCR试剂是保证检测质量非常重要的关键。一、通过实时荧光PCR扩增曲线评价【扩增曲线图解读】实时荧光PCR由于每个循环要监测荧光信号值,因此都有拟合好的扩增曲线,通过扩增曲线可以很直观、准确的了解和评判试剂质量的好坏。认真研究扩增曲线图可以看出非常多的问题,基本上可以判定试剂的质量。下图是一张非常漂亮的扩增曲线图:从上图可以看出几个问题:1.       总体看曲线拐点清楚,指数期明显,扩增曲线整体平行性极好,基线平无上扬现象,低浓度样本扩增曲线指数期明显。2.       曲线指数期斜率,反应了扩增效率,越大说明扩增效率越高。扩增效率越高,试剂灵敏度表现会越好。3.       基线,图上的基线也就是阴性样本的扩增曲线,平直或略微下降是好试剂的表现,阴阳性清楚,不易误判。如果有上扬趋势,有可能造成阴性标本误判。4.       曲线与曲线间平行性非常好,说明各反应管扩增效率相近,外标准定量建立在每管扩增效率一样的假定基础上
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