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PCR自诞生以来,人们就在努力探索PCR定量的方法。荧光素染色凝胶电泳在PCR最初的一段时间是唯一的检测技术,因此人们在凝胶电泳的基础上使用扫描照片进行光密度分析,以求实现PCR的相对定量。 但是由于普通凝胶电泳检测本身的不特异性,只能进行粗略的相对定量,难以满足人们日益对精确定量的渴望,不过由于普通凝胶电泳光密度分析简捷易行,成本低,目前还是科研还很常用。但是难以满足临床应用的要求。 由于固相捕获技术的成熟和应用,特别是酶联免疫吸附试验(ELISA)的成功,给核酸定量提供了一个思路。此后,应用固相捕获的PCR定量技术应运而生。即在PCR扩增以后,在微也板上借用酶联免疫吸附试验(ELISA)的原理,使用酶标抗体,进行固相杂交来实现定量。被称为PCR-ELISA: PCR-ELISA原理: 首先,使用亲和素包被微孔板,再用生物素标记捕获探针3`端(捕获探针5`端和待检靶序列5`端的一段互补)通过生物素和亲和素的交联作用将捕获探针固定在微孔上,制成固相捕获系统。 其次,在扩增时,引物用抗原(生物素、地高辛、荧光素酶等)标记,这样扩增产物中就会代有抗原。 用扩增产物与微孔上的捕获探针杂交,靶序列被捕获。再在微孔中加入用辣根过氧化物酶标记的抗体,抗体与靶序列上的抗原结合,再加入底物使之显色。从而实现定量。 虽然PCR经过长时间的探索,PCR-ELISA逐渐成熟, < 1 > < 2 >
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