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尽管PCR目前在临床上的应用存在争议,由于试剂,设备以及人员素质等原因其结果也不尽如人意,但作为分子生物学基本技术之一,究其技术本身是成熟的。多年以来PCR技术只作为一种高灵敏的定性技术而被应用,既制约了PCR质量控制的建立,又大大制约了PCR技术的应用,近年来定量PCR的出现为PCR的应用开拓了广阔的前景。 原理:经典PCR一般分为扩增和检测两个阶段,常用溴乙锭染色,凝胶电泳为定性检测手段。由于定性实际上就是定量的一种粗约表现,因此只要对检测手段进行改进就可以实现精确定量。荧光标记技术是分子生物学最常用的标记技术,荧光染料或荧光标记物与扩增产物结合后,被激发的荧光强度和扩增产物成正比。而根据扩增原理,扩增是呈指数增长,因此在反应体系和反应条件完全一样下,样本含量应与扩增产物的对数成正比,故在一定的条件下荧光强度和样本含量成正比。 方法1:非特异性染料结合法 利用某些荧光素能和双链DNA结合,结合后的产物具有强的荧光效应(如上图)。当扩增结束后,随温度的降低,DNA复性成为双 < 1 > < 2 >
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