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;-基因的突变:在α-基因的突变中，以 缺失型突变最为常见，其缺失的范围可从两个α-基因均缺失至一些小片段的缺失均 可在人群中检出，α-基因的另一突变即为单碱基置换，目前已发现的突变有18种以 上，它包括错义突变，无意突变剪接部位突变及起始信号突变.(二)β-基因的突变: β-基因的突变以点突变为主，即单核苷酸置换是β-基因的主要突变类型，它亦有碱基的括入和缺失，在我国检出的β-基因点突变见下表: 位置 性质 对基因功能影响 类型 启动子区(TATA) -32 C→A -30 T→C mRNA转录效率下降 -29 A→G β链合成减少 β＋ -28 A→G RNA剪接基因突变 IVS-1n＋1 G→T IVS-1n＋5 G→C mRNA合成异常 β＋ IVS-13 T→G IVS-2n＋654 C→T 误义突变 CD26 G→A 正 无意突变 CDn A→T β链合成短 β CD43 G→T 突变 缺失: CD8—AA CD31—C CD41/42-TCTT 括入 ＋40±43-AAAC CD14/15＋G CD27/28＋C CD71/72＋T，＋A 起始裂解 ATG→AGG 四、PCR技术在α地贫基因诊断中的应用 α地贫是由α珠蛋白基因不同范围的缺 失及点突变所致，但以缺失型突变最为常见，因此，α地贫PCR诊断的主要任务就在于快速检出α珠蛋白基因的缺失片段.(一)α基因全部缺失(--1--)的PCR诊断 α基因全部缺失所引起的临床表现为HbBar+胎儿水肿综合征，用PCR方法检测等，其反应体系组成如下: 引物: PC01；5TACTGTAGATACCCGTGTACAA3 PC02；5ATCARGGAAACATAGTAAT3 PC03；5ACACAACTGTGTTACCTAGC3 PC04；5CAACTTCATCCACGTTCACC3 扩增片段：αPC01-PC02；136；- βPC03-PC04；110；110 扩增条件：93℃(30)；45℃(30)；65℃ 检测：3%珠脂糖电泳 注):PCO3和PCO4扩增片段位于β基因，作为内对照. 结果判定:在正常人PCO1-PCO2扩增片段为B6bp，PCO3-PCO4为110bp，而HbBart胎儿水肿综合征仅有PC)3-PCO4的110扩增片段而无PCO1和PCO2的136bp扩增产物.(二)部分α基因缺失型的PCR检测 除HbBart胎儿水肿外，在α地贫中，尚有部分α基因缺失的类型，它仍是α地贫2，α地贫HbH病，应用PCO1和PCO2时正常和缺失染色体均有扩增，因此对2，2，HbH及正常个体不能鉴别，因此又有人设计了一组新的引物体系进行α基因缺失的检测，该本系的组成及操作过程如下 引物名称 序列位置 S1 F5GTGTTCTCAGTATTGGAGGGAA3 4 S1 3端 S2 F5GACACGCTTCCAATACGCTTA3 α3HVR 5端 S3 R5CTACTGCAGCCTTGAACTCC3 4α2 5端 α1 F5CGGGCCTGGGCCCTCGGCCC3 R5CCACGGGGGTACGGGTGCAG3 二者的3端 α2 F5CGGCTGCGGGCCTGGGCCGC3 R5ATTCCGGGACAGAGAGAACC3 五、PCR技术在β地贫基因诊断中的应用 β地贫的基因突变主要是单碱置换.目前在世界范围内发现的单碱基置换达160余种，其中在中国发现的有21种，由于β珠蛋白基因的突变主要为单碱基碱置换，因此其诊断途径与β地贫完全不同，其诊断的主要目的即检出点突变.(一)检测已知突变位点 1.PCR-ASD与ROB PCR-ASO是快速简便的检测已知β珠蛋白基因点突变的方法，主是利用PCR技术扩增靶基因的适当片段，然后用人工合成的含突变位点的标记寡核苷酸探针，逐一筛查，泛检测的反应体系包括. 引物:见下表 引物名称 位置 序列 扩增片段大小bp βA -129--104 A5GTACGGCTGTCATCACTTAGACCTCA3 A→B600 βB 编码97-89 B5TGCAGCTTGTCACAGTGCAGCTCACT3 C→D422 βC EVS-2475-476 C5GTGTACACATATTGACCAAA3 A→D1502 βD 编码114→108 D5AGCACACAGACCAGCACGTT3 41 点膜与杂交:PCR-ASO是将PCR扩增产物点于杂交膜上，然后与上述的ASO探针杂交，根据杂交的结果判断分析，以确定突变位点RDB以改传统的杂交途径，它是将一系列的标记ASO探针固定在膜上，然后用之与PCR扩增产物进行杂交，使检测程序大大简化. 张是增等人根据我国常见的β基因突变情况，将18种5突变分为两组，一组为常见的，另一组为非常见，与这些突变相对应的ASO探针反分为两组，将这些探针固定于膜上，再与相反的PCR扩增产物进行杂交，常用的7种ASO探针可检出98%的中国人β基因点突变同RDB方法简便，快速，使用非同项素标记的ASO探针使之节约于推广，而是探针膜条便于保存和运选. 2.等位特异PCR(ASAPCR) ASAPCR是检测已知β基因突变优点进行β地贫基因诊断又一有效手段，有人用该方法检测Cordows41-42，TVSnt654，CD17TATA盒-28和CD71-72，这五种我国南方常见的β基因点突变诊断β地贫，完成的用于产前诊断. 3.PCR-RFLP检测引起内切酶切点改变的突变诊断β地贫. 突变位置 内切酶 切点影响 β MnlⅠ 丢失 CD17 MaeⅠ 生成 -29 NIaⅢ 生成 CD43 HinfⅠ 消失 TVS-1nt1 BsPMⅠ 消失 CD41-42 HinFZ 酶解产物变化 (二)突变性质不明β地贫的诊断 在β地贫中，尚有一部分人群的基因突变性质不明，但临床表现为β地贫则可用PCR-SSCP、PCR-DGGE、PCR-TGGG进行突变片段筛查，然后对异常的片段进行快速测定，以确定突变位置性质及β地贫的关系.
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