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    PCR技术在血友病A基因诊断中的应用

    位点 引物序列 内切酶 长度 酶解片段 Ext18 5-TAAAAGCTTAAATGG TCTAGGC-3 BclⅠ 142 99+43   5-TTCGAATTCTGAAATT ATCTTGTTC-3        Int22 5-CACGAGCTCTCCATCT GAACATG-3 XbaⅠ 96.0 68+28   5-GGGCTGCAGGGGGGG GGGACAACAG-3       Int19 5-GGCGAGCATCTACAT GCTGGGATGAGC-3 HindⅢ 717 469+167+81   5-GTCCAGAAGCCATTC CCAGGGGAGTCT-3       (二),Amp-FLP  在FVⅢ区内尚有两个VNTP区,一个位于DXS52,另一个为(CA)n位于DX102内,它 仍均具有复杂的多者性,亦可用于连锁分析,是引物及扩增产物的多者性见下表 位置 引物 片段 范围 DXS52 5GGCATGTCATCACTTCT CTCATGTT-3 14 0.7-3.0   5CACCACTGCCCTCACG TCACTT-3     DX102 5GTAGTCTCAGTCGACA TGCTTTGAC3 8 152±   5GCTGAGAAAGTAGATC CTAAGTGTTC3      (三)血友病APCR基因诊断程序  1.母亲、先证者的RFLP及Amp-FLP,确定风险染色体  2.检测胎儿性别(SRT)  3.检测胎儿的RFLP及AmP-FLP四、散发病例FVⅢ基因突变的PCR检测  由于因子FVⅢ的基因突变以点突变为主,而且具有高度特异性,因此,单独网点 突变的检测方法仍以诊断,对于形发病例来说,可用PCR-SSCP,PCR-DGGE及其它的点 突变是筛查方法确定点突变血友病A之间的关系具有重要意义,尤其是PCR-DGGE已用 于血友病A基因点突变的筛查.
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