AluPCR:用重复序列引物扩增来源复杂的人DNA

引言　　聚合酶链反应PCR使不同来源的特异核酸片段的分离及分析发生了革命，但应用PCR分离，分析特定DNA区域需要了解靶区域的边侧序列，这使扩增局限于已知DNA序列。我们研究了从复杂的人和其他种DNA混合物中扩增未知DNA序列。特别是，我们应用PCR 分离出了在啮齿类细胞背景中含有人染色体片段的体细胞杂合体中的人DNA。使存留在杂合子中的人特异区域序列得到分离和鉴定，避免了克隆DNA库和用人特异重复序列探针他离人序列克隆。我们所用的方法，即AluPCR，也已被证明可从克隆中快速分离插入的人类DNA，这将PCR的应用扩大到克隆于Lambda和酵母人工染色体(YAC)载体上的基因组DNA，PCR在大基因组区域上的应用为分析人基因提供了另一个工具。　　AluPCR方法特点在于利用人DNA中普遍存在的Alu重复序列，这种300bp序列的拷贝约 900.000个，分布于整个人基因组。虽然Alu重复序列各拷贝间有很大差别，但已确定出了一个相同序列，且重复子中一些区域是极为保守的。我们认为，可设计合适的能识别这些保守区的PCR引物，进行有效的内-Alu扩增，从复杂源中分离人DNA。为了只扩增体细胞杂合子中人DNA而不同时扩增啮齿类Alu等位子，我们需要鉴定人特异引物。从杂合细胞株中扩增人特异DNA　　我们合成了大量引物，测试了它们扩增人、体细胞杂合子及啮齿类DNAs的
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