Taq DNA聚合酶详答

对Mg2+浓度非常敏感.以活性程度很低的鲑鱼精子DNA为模板，dNTP的浓度为0.7～0.8mmol/L时，用不同浓度Mg2+进行 PCR反应10min，测定结果为Mgcl2浓度在2.0mmol/L时该酶催化活性最高，此浓度能最大限度地激活TaqDNA聚合酶的活性，Mg2+过高就抑制酶活性，当Mgcl2浓度在 10mmol/L时可抑制40～50%的酶活性.由于Mg2+能与dNTP结合而影响PCR反应液中游离的Mg2+浓度，因而Mgcl2的浓度在不同的反应体系中应适当调整，优化浓度.一般反应中Mg2+浓度至少应比dNTP总浓度高0.5～1.0mmol/L.适当浓度的KCL能使Taq DNA聚合酶的催化活性提高50～60%，其最适浓度为50mmol/L，高于75mmol/L时明显抑制该酶的活性.(三)忠实性　　TaqDNA聚合酶具有5→3聚合酶活性和5→3外切酶活性，而无3→5外切活性，它不具有Klenow酶的3→5校对活性.因而，在PCR反应中如发生某些碱基的错配，该酶是没有校正功能的.Taq DNA聚合酶的碱基错配机率为2.1×10-4.(四)抑制剂　　低浓度的尿素、甲酰胺、二甲基甲酰胺(DMF)和二甲基亚砜(DMSD)对Taq DNA聚合酶的催化活性并无影响.极低浓度的离子表面活性剂如脱氧胆胺酸钠(小于0.06%)，十二烷基肌氨酸钠(小于0.02%)，十二烷基硫酸钠(SDS，小于0.01%)几乎可完全抑制该酶的活性.而非离子表面活性剂在较高浓度(Tween20，NP-40.和Tritox-100)如>5%时方能抑制该酶的活性.变性剂对TaqDNA聚合酶活性的影响变性剂浓度活性(%) 乙醇 ≤3% 100 　 10% 110 尿素 ≤0.5mol/L 100 　 1.0mol/L 118 　 1.5mol/L 107 　 2.0mol/L 82 DMSO ≤1% 100 　 10% 53 　 20% 11 DMF ≤5% 100 　 10% 82 　 20% 17 甲酰胺 ≤1% 100 　 15% 86 　 20% 39 SDS 0.001% 105 　 0.01% 10 　 0.1% 〈0.1 　　低浓度的NP-40(0.05%)和Tween20(0.05%)能增强TaqDNA聚合酶的活性.低浓度SDS对该酶的抑制作用可加入一定浓度的NP-40和Tween20抵消.TaqDNA聚合酶可在-20℃贮存至少6个月.
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