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    灵敏的一步qRT-PCR

    I ,提供针对困难RNA二级结构更大的成功 * 具有热启动特异性的Platinum® Taq DNA 聚合酶,提高特异性 * LUX®荧光引物或者双标荧光探针卓越的性能( 图13 和 14 ) * SYBR® Green I 染料简单方便的检测( 图15 和 16 ) * 多种实时仪器平台上已经验证的性能 图13 SuperScript® III Platinum® One-Step qRT-PCR Kit优于其它一步qRT-PCR试剂盒 使用invitrogen SuperScript® III Platinum® One-Step qRT-PCR Kit(红色数据)或者ABI TaqMan® One-Step RT-PCR Master Mix(蓝色数据),10倍系列稀释的HeLa总RNA(100ng到0.1pg),200 nM 每种扩增引物,100nM TaqMan®探针和ROX Reference Dye,通过实时RT-PCR定量β -actin靶标。50℃ 进行cDNA合成15分钟,接着使用ABI PRISM® 7700进行40个PCR循环。 图14 使用SuperScript® III Platinum® One-Step qRT-PCR Kit获得更高的灵敏度 使用invitrogen SuperScript® III Platinum® One-Step qRT-PCR Kit(红色数据)或者Qiagen Quantitect® Probe RT-PCR Kit(蓝色数据),10倍系列稀释的HeLa总RNA(100ng到0.1pg),200 nM 每种扩增引物,100nM TaqMan®探针和ROX Reference Dye,通过实时RT-PCR定量β -actin靶标。50℃ 进行cDNA合成15分钟,接着使用ABI PRISM® 7700进行40个PCR循环。 图15 SuperScript® III Platinum® SYBR® Green One-Step qRT-PCR Kit在较宽的动态范围内提供方便的检测 使用SuperScript® III Platinum® SYBR® Green One-Step qRT-PCR Kit,200 nM GAPDH引物,10倍系列稀释的HeLa总RNA(100ng到0.1pg)进行实时PCR..所有的反应在ABI PRISM® 7700上进行,反应步骤:50℃ RT 3分钟,接着进行50个循环,95℃ 15秒;60℃ 30秒。 图16 SuperScript® III Platinum® SYBR® Green One-Step qRT-PCR Kit优于竞争对手 Panel A: 使用invitrogen SuperScript® III Platinum® SYBR® Green One-Step qRT-PCR Kit(红线 标准曲线:y = -3.57x + 31.05; R = 0.998)或者Qiagen QuantiTect® SYBR® Green RT-PCR Kit(蓝线 标准曲线:y = -3.612x + 32.10; R = 0.981),200 nM β -actin引物,10倍系列稀释的HeLa总RNA(100ng到0.1pg),按照每个生产商提供的操作步骤进行实时PCR。反应在ABI PRISM® 7700上进行。 Panel B: 使用invitrogen的SuperScript® III Platinum® SYBR® Green One-Step qRT-PCR Kit(红线 标准曲线:y = -3.52x + 31.15; R PCR Kit (红线 标准曲线:y = -3.52x + 31.15; R = 0.995)或者Stratagene的QuantiTect® SYBR® Green RT-PCR Kit(蓝线 标准曲线:y = -3.893x + 32.89; R = 0.996),200 nM β -actin引物,10倍系列稀释的HeLa总RNA(100ng到0.1pg),按照每个生产商提供的操作步骤进行实时PCR。反应在ABI PRISM® 7700上进行。 产 品 规 格 目录号 价 格 SuperScript® III Platinum® One-Step qRT-PCR Kit 100反应 11732-020 查 询 500反应 11732-088 查 询 SuperScript® III Platinum® SYBR® Green One-Step qRT-PCR Kit 100反应 11736-051 查 询 500反应 11736-059 查 询 Platinum® Quantitative RT-PCR ThermoScript® One-Step System 提供从总RNA或者poly(A)RNA、一步的、方便而特异的实时RT-PCR结果。克隆禽反转录酶ThermoScript® RT 经过基因工程改造,具有更高的热稳定性(高达70℃),可以转录复杂二级结构RNA和提高引物的特异性。 * 提供高达70℃的cDNA合成,以获得更高的引物特异性和针对RNA二级结构更大的成功( 图 17 ) * 经过优化可以为双标记荧光探针提供最高的性能 * 减少RNase H活性,提供更高的第一链cDNA产量 * 可以检测低至10个分子的RNA模板 图17 大量二级结构、富含GC、 RNA的高产量RT-PCR 按照生产商的推荐,使用15单位ThermoScript® RT,或者15单位AMV RT,从10ng总RNA合成cDNA。取1/10反应产物,使用Platinum® Taq DNA Polymerase High Fidelity进行扩增。 图18 高产量Platinum® Quantitative RT-PCR ThermoScript® One-Step System 产 品 规 格 目录号 价 格 Platinum® Quantitative RT-PCR ThermoScript® One-Step System 100反应 11731-015 查 询 500反应 11731-023 查 询
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