荧光 ELISA 两种荧光底物和一种显色底物的比较

前言 EIA ，酶免疫测定（ Enzyme Immunoassay ）或称之为 ELISA （酶联免疫吸附分析法， Enzyme-Linked Immunosorbent Assay ）是应用最广泛的固相免疫分析方法，它在基础研究和常规的临床实验室中有着非凡的适用性（ 2 － 4 ）。传统的步骤采用将抗原吸附到塑料上或是用预固定的抗体来捕捉同源的抗原，而且这仍是目前最受推崇的方法。采用这些步骤时人们认为抗体的结合能力通常只有十倍，而且由于空间位阻的原因，与目标物质的结合并不会随着固相上抗体的密度而增加。传统的 EIA ／ ELISA 步骤使用酶联的二抗来检测与抗原结合的一抗，但是最近出现了许多种不同的改进方法。这包括了使用亲和素／链霉亲和素的复合物来检测生物素标记的一抗或二抗，这些额外成分的功能是将信号放大到可以检测的水平。当前，有三种主要的酶和它们的显色底物用于显色 ELISA ，按反应效率的数量级和使用的频度排列是： Horseradish peroxidase （ HRP ）、 Alkaline phosphatase （ AP ）、 β -galactosidase （ β-gal ）和 glucose 6-phosphate dehydrogenase 。这些酶常用的底物包括有： 2 ， 2’ -azino-di [ 3- et
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