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降低非靶标基因的表达,最终经历凋亡(apoptosis)。 siRNA 短的(或者小的)干扰RNA ( Short (or small) interfering RNA) ;哺乳动物细胞参与引起RNAi反应的21-23核苷酸的短的RNA双链。 RISC RNA诱导沉默复合体 (RNA-induced silencing complex);即所推测的多蛋白复合物,将siRNA和细胞内mRNA结合到一起,激活裂解机制(可能是内切核苷酸的),释放mRNA并进行降解。 shRNA 短的发夹RNA (Short hairpin RNA);也称短的干扰发夹 (short interfering hairpin);在体内通过RNAi降低互补序列基因的表达。 Pol III 启动子 Pol III 启动子 U6或者HI(Pol III promoter,U6 or HI),通常用来驱动shRNA的产生。Pol III 启动子具有在某一确定起始位点上游启动转录所需要的全部元件。 Pol III 终止子 Pol III终止子( Pol III terminator);4个或者更多个T,提供Pol III依赖的转录终止。 U6 启动子 U6 启动子(U6 promoter)一种pol III型启动子,允许产生确定末端的小RNA(参看pol III启动子)。 入门载体 (entry vector) 包含attL位点,用来克隆DN-段的Gateway®载体。U6入门载体, pENTR®/U6,专门设计使用U6 pol III型启动子和终止子序列,RNAi靶序列克隆进入后将在哺乳动物细胞中形成shRNA。 目的载体(destination vector) Gateway®适合的目的载体(DEST)包含attR位点,可以与入门克隆进行重组,构建表达载体。BLOCK-iT™ RNAi慢病毒和腺病毒 DEST载体接受来自U6入门载体的RNAi框。此外,也有在原核、酵母、昆虫或者哺乳动物系统表达天然蛋白或者融合蛋白的DEST载体可供选择。 LR Clonase™便于attL和 attR位点在LxR Gateway®重组反应中进行重组的一种酶混合物,可以把DNA序列从入门载体转移到目的载体。 < 1 > < 2 >
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