罗汉果的组织培养

很慢，不能满足市场需求。为了扩大罗汉果的繁殖，可采用组织培养的方法来快速繁殖罗汉果。（一）取材和处理将罗汉果的种子先用含0.02%餐洗净的自来水浸泡10分钟，浸泡时要不断搅动，然后用自来水冲洗干净。将洗净的种子拿到超净工作台上进行消毒接种。把种子放到一干净三角瓶中，加入70%的酒精消毒30秒，这时也要不停的摇动，将酒精倒掉之后，再加入0.1%升汞溶液消毒5分钟，这时同样也要不断搅动，然后用无菌水冲洗5次，也可以用10%的次氯酸钠溶液消毒15分钟，再用无菌水冲洗3-5次。消毒完毕之后，将种子从三角瓶中取出，放在消毒滤纸上将水分吸干，放置于不含激素的MS培养基上培养三周左右，可获得长有5-6片真叶的罗汉果无菌苗，取其叶片作愈伤组织诱导的实验材料。（二）叶片培养诱导再生植株 1、配制诱导分化再生培养基本实验中使用的诱导再生培养基为MS基本培养基，即MS的大量元素、微量元素、有机物和铁盐4种基本成分，再附加6BA0.7-1.5mg/L、IBA 0.3-0.7mg/L,用1mol/L的KOH调节PH至5.8，加琼脂粉5克，高压灭菌后分装入90MM的培养皿中，每皿约25毫升，在超净工作台上吹干后加盖封口，以防污染。实验结构显示，在MS基本培养基中添加KT、ZT、IAA、NAA、2，4-D等激素，虽然也可以诱导出愈伤组织，但基本上不能分化产生芽，所以建议不要再用这些激素做重复性实验，以防浪费人力、物力和时间。 2、接种与培养由于使用的是试管苗，所以实验材料无需再进行表面消毒处理。从试管苗上摘取整片生长健壮、完全展开的幼叶，将叶片放在无菌滤纸上，用解剖刀在叶片背面（远轴面）横划三刀，但不要完全切断叶片，就是说不要切断叶子的上表皮。将叶片平放于培养皿中的培养基上，使背面与培养基接触。摆放密度要适中，以每片叶子间隔1CM左右为宜，过密则营养不足，过稀则不仅浪费培养基而且再生频率会降低，一般说来每皿可放置20-25片。叶片在培养室内培养大约一周左右，体积明显膨大呈凹凸不平状，这预示细胞在进行生长和活跃的分裂。再过3周左右，可以看到从外植体有切口的地方，分化出许多圆形小突起，这些突起便是分生性细胞团或芽原基。再经过一段时间，众多的小突起就分化出一些丛生的芽。由于整个分化的周期比较长，所以中间最好更换一次培养基。由于芽丛生在一起，又是在培养皿中，所以很难继续生长。因此需要把丛生芽从培养皿中转移到三角瓶中，使其长高长壮。 3、生根配制生根培养基，成分是1/2MS基本培养基，附加NAA0.3-0.5mg/L,琼脂粉5.5-6.0g/L,调PH5.8，煮沸后分装于100ml或150ml三角瓶，用羊皮纸封口，经高压灭菌后备用。从壮苗培养基上选取高的壮苗，再在无菌滤纸上用解剖刀从基部切去3-5MM，将小苗转到生根培养基上，每瓶7-8株为宜。将三角瓶置于常规培养室中培养，大约10d左右就可看到小苗长出比较发达的根系。用羊皮纸封口还是用塑料纸封口，对三角瓶内培养的材料的生长影响很大。用塑料纸封口可以保持三角瓶内有较高的空气湿度，有利于芽和苗的高度生长；虽然也可以长根，但根的质量不好，常常是在近培养基的上方嫩茎的周围生出许多纤细的毛状根。用羊皮纸封口通气性较好，有利于壮苗，也有利与生长出健壮的根。因此，选用哪种封口材料，应根据培养的目的来决定。 4、移载待根长至1CM左右时，将捆扎三角瓶口的绳子或皮筋解开，但不要把盖子拿掉。将三角瓶转到低于培养室温度的地方，最好有散射的太阳光，约一周时间即可以移栽。移栽用的介质是中性土壤，且最好经过消毒处理。移栽的小苗注意湿度的调节，其周围的空气湿度比移栽基质的湿度更重要。一旦移栽，其周围湿度降低，就会使叶片皱褶，容易死苗，湿度过高则容易烂根。生长试管苗的温室应在20-25度，这样与培养室的温度相当，有利于成活。光线不可太强，开始几天最好遮阴，为了保证试管苗的正常生长，温室内应经常喷洒杀虫剂、杀菌剂。 5、利用愈伤组织生产罗汉果苷培养的愈伤组织细胞仍然含有罗汉果苷，因此可以不进行再生芽的诱导而直接用愈伤组织进行罗汉果苷的工厂化生产。关于罗汉果苷的提取工艺已经基本成熟，只要能获得大量愈伤组织，就可以实现大规模工厂化生产。
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