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石蜡切片虽然是经典的方法,但又是最基本的方法,它与其他新的技术方法相结合,使传统的老技术扩大了其应用范围,开辟了许多新领域,增加了许多新的研究、观察内容。随新的仪器及新的研究技术的不断问世及使用,使组织学的观察研究从简单的形态结构深入到各种成分的定性观察,又从定性转向定量计测,使细胞组织的形态,功能及代谢三结合,从而达到定性可靠、定位准确及定量可测。 与免疫学技术结合 组织制片技术与免疫学技术结合构成免疫组织(细胞)化学技术,利用抗原与抗体的特异性结合原理,检测组织切片中细胞组织的多肽及蛋白质等大分子物质的定性和定位观察研究。不论哪种免疫组织化学技术都包括抗体的制备、组织材料处理、制备玻片标本以及免疫染色。冰冻切片手续简便,制片过程中抗原活性丢失少,但组织细胞形态较差;石蜡切片步骤繁多,制片中抗原活性有所减低,但组织细胞形态清晰,是免疫组织化学常规制备切片方法之一。一般石蜡包埋的组织切片用于检测胞浆或核内的抗原,不宜做表面抗原染色,有人将新鲜组织浸泡于冷磷酸缓冲液内48小时,再固定于96%乙醇或其他固定液固定的组织切片,可用于表面抗原染色。乙醇、丙酮等固定剂对抗原破坏较轻,但结构保存较差。最常用的固定液有中性和缓冲福尔马林,它可与蛋白质交叉结合封闭抗原,在进行免疫染色前,切片再用蛋白酶消化,以暴露抗原部位、增强抗原的反应。在石蜡切片上进行的常用的免疫组化染色有免疫酶组 < 1 > < 2 >
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