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具】分光光度计；离心机；恒温水浴；研钵；具塞刻度试管（25ml×13）；刻度吸管（1ml，2ml，5ml各1支）；容量瓶（50ml×2）。【试剂】麦芽糖标准液（1mg/ml）：称取100mg麦芽糖，用蒸馏水溶解并定容至100ml；DNS试剂（3,5-二硝基水杨酸）：精确称取3,5-二硝基水杨酸1g，溶于20ml 12mol/L NaOH溶液中，加入50ml蒸馏水，再加入30g酒石酸钾钠，待溶解后用蒸馏水定容至100ml。盖紧瓶塞，勿使CO2进入。若溶液混浊可过滤后使用；0.1mol/L pH5.6的柠檬酸缓冲液：A液（0.1mol/L柠檬酸）—称取分析纯柠檬酸21.01g，用蒸馏水溶解并定容至1L；B液(0.1mol/L柠檬酸钠)—称取柠檬酸钠29.41g用蒸馏水溶解并定容至1L；取A液55ml与B液145ml混匀，即为0.1mol/L pH5.6的柠檬酸缓冲液；1%淀粉溶液：称取1g淀粉溶于100ml 0.1mol/L pH5.6的柠檬酸缓冲液中。【方法】1.酶液提取：称取25℃下萌发3～4天的小麦种子1.0g（芽长1.0~1.5cm），置研钵中，加少量石英砂和2ml蒸馏水，研磨成匀浆后转入离心管中，用7ml蒸馏水分次将残渣洗入离心管提取液在室温下放置提取15～20min，每隔数分钟搅动1次，使其充分提取。然后在3000rpm转速下离心10min，将上清液倒入50ml容量瓶中，加蒸馏水定容至刻度，摇匀，即为淀粉酶原液。吸取上述淀粉酶原液5ml，放入50ml容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度摇匀，即为淀分酶稀释液。2.麦芽糖标准曲线制作：取7支干净的具塞刻度试管，编号，按表33-1加入试剂。表33-1 制作麦芽糖标准曲线配方表 试 剂 管 号 1 2 3 4 5 6 7 麦芽糖标准液(ml) 0 0.2 0.4 0.8 1.2. 1.6 2.0 蒸馏水(ml) 2.0 1.8 1.6 1.2 0.8 0.4 0 麦芽糖含量(mg) 0 0.2 0.4 0.8 1.2 1.6 2.0 3,5-二硝基水杨酸(ml) 2 2 2 2 2 2 2 摇匀，置沸水中浴中煮沸5min。取出后流水冷却，加蒸馏水定容至20ml。以1号管作为空白调零点，在540nm波长下比色测定。以麦芽糖含量为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线。3.酶活力的测定：取6支干净的具塞刻度试管,编号,按表33-2进行操作。 表33-2 配活力的测定配方表 操作项目 管 号 Ⅰ-1 Ⅰ-2 Ⅰ-3 Ⅱ-1 Ⅱ-2 Ⅱ-3 淀粉酶原液(ml) 1.0 1.0 1.0 0 0 0 钝化β-淀粉酶 置70℃水浴中15min，取出后在流水中冷却 淀粉酶稀释液(ml) 0 0 0 1 1 1 DNS试剂(ml) 2.0 0 0 2.0 0 0 预保温 40℃恒温水浴中保温10min 1%淀粉溶液(ml)(40℃) 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 保温 40℃恒温水浴中准确保温5min DNS试剂(ml) 0 2.0 2.0 0 2.0 2.0 摇匀，置沸水浴中5min，取出后冷却，加蒸馏水至20ml。摇匀，在540nm波长下比色，记录测定结果。4.结果计算：用Ⅰ-2、Ⅰ-3吸光度平均值与Ⅰ-1吸光度值之差，在标准曲线上查出相应的麦芽糖含量（mg），再按下式计算α-淀粉酶的活力（Aα），淀粉酶活性以麦芽糖mg·g﹣1·min﹣1表示：Aα= Ⅱ-2、Ⅱ-3吸光度平均值与Ⅱ-1吸光度值之差，在标准曲线上查出相应的麦芽糖含量（mg），按下式计算（α β）-淀粉酶总活力AT：AT＝ 式中 A—淀粉酶活性，Aα为α-淀粉酶的活性，AT为淀粉酶总活性，主要是α、β淀粉酶的活性；Cα—α-淀粉酶水解淀粉生成的麦芽糖量（查标准曲线求值，以下同）；CT—（α β）淀粉酶共同水解淀粉生成的麦芽糖量；V1—显色所用酶液体积（ml）；t—酶作用时间（min）；Vt—样液稀液总体积（α-淀粉酶为50ml,α β淀粉酶为500ml）；FW—样品鲜重（g）。
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