SPA 酶联免疫吸附试验（SPA-ELISA）

SPA－ELISA技术原理SPA 能天然地与人及某些哺乳动物的IgG分子上的Fc片段结合，一个分子的SPA可以同2个IgG分子以化学共价键结合(这不是真正的免疫反应，又称为假免疫反应)，利用这个特性，以SPA代替IgG抗体而应用于ELlSA中。材料与试剂1．SPA－HRP结合物,可向有关生物制品厂购买，也可自制，制法如下：(1) 取5mg HRP(RZ=3.0)溶于1ml新配制的0.3mol/L pH8.1 NaHCO3液中。(2) 加入0.1ml用无水乙醇配制的1%的1－荧光－2，4二硝基苯，室温(20℃)温和搅拌1h。(3) 加入1ml0.16mol/L 乙二醇，室温搅拌1h。(4) 以0.01mol/L pH9.5碳酸盐缓冲液充分透析。(5) 加入经0.01mol/L pH 9.5碳酸盐缓冲液平衡的SPA 5mg/ml，于20℃温和搅拌2h~3h。(6) 加入5mg KBH4，混匀后，4℃放置3h。(7) 以0.05mol/L pH 7.4 PBS透析过夜。(8) 过Sephadex G100柱(100cm×2cm)，以0.5mol/L pH7.4 PBS液洗脱，流速10ml/h。(9) 测OD403nm，集SPA－HRP活性部分。(10) 将高活性组分合并，加入甘油(含30%)置低温保存。也可以采用过碘酸钠法，制法如下：①5mg HRP溶于1ml新配制的
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