SPA的提取

SPA提取的方法很多，包括煮沸法、溶菌酶法、葡萄球菌溶素法、超生波法以及三氯醋酸法等。现将常用的方法介绍如下：1．煮沸提取法⑴ 将菌株接种于蛋白胨葡萄糖琼脂培养基上，37℃培养20h~24h。⑵ 以0.15mol/L pH5.9PB液将菌苔洗下，配成10%(V/V)的悬液。⑶ 水浴中煮沸1h，迅速冷却至4℃，4 000r/min离心20min，去沉淀。⑷ 以1mol/LHCl将上清液调pH至3.0~3.5，然后4 000r/min离心30min。⑸ 沉淀以pH5.9PB溶解，然后12 000r/min离心20min。⑹ 上清液加4.7倍量的95%酒精，充分混合后，.4 000r/min离心20min。⑺ 沉淀(可直接冻干为粗提SPA制品)加PH7.4PBS液溶解，12 000r/min离心20min。⑻ 上清液即为粗提SPA液。⑼ Sephadex G100过柱，上样后用0.05mol/L pH7.4 PBS液洗脱，流速控制在每管2ml~3ml/20min，收集流出液。⑽ 测OD275nm值及用对流免疫电泳检测每管的活性，将有活性的各管合并、浓缩或冻干。2．溶菌酶消化法⑴ 将培养的SPA菌以pH 8.0 0.02mol/L Tris－HCl缓冲液配成10%~15%的悬液。⑵ 按20:1(W/W)的量加入SPA菌液与溶菌酶(活力为1万U/mg蛋白)37℃水溶搅拌24h。⑶ 置
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