E玫瑰花环试验

l，置37℃水浴自然沉淀30min～40min，吸取全部血浆（约1ml）。2．于血浆中加Hank’s液数毫升，洗涤，1 500r/min离心5min～10min，弃上清。重复洗涤4次，沉淀均匀即为淋巴细胞悬液。3．采绵羊肝素抗凝血，加数倍Hank’s液，洗涤3次，最后以Hank’s配成10％悬液，4℃保存。4．取0.1ml淋巴细胞悬液，加10％红血球悬液0.1ml，加小牛血清0.1ml。5．37℃水浴10min，低速离心（600r/min）5min。6．吸弃多余的上清液后，放入4℃冰箱2h～4h。7．取出后，将沉淀轻轻摇起，加0.8％戊二醛0.1ml，混匀后4℃固定15min。8．将干净的玻片用Hank’s液沾湿，滴一小滴混悬液，让其自然散开即可。9．自然干燥后，用姬姆萨—瑞氏液（Giomsa—weight）或苏木精—伊红染色，水洗，干燥镜检。结果判定凡一个淋巴细胞结合3个或3个以上的红细胞者为一个E—玫瑰环。检查200个淋巴细胞，计算其玫瑰花环形成率。注意事项1．影响E—玫瑰花环试验最主要的因素淋巴细胞和红细胞的新鲜程度，被检血样必须新鲜，无菌，采血后要求在3h～4h内进行检验，否则由于淋巴细胞的死亡，受体脱落，影响检查结果。红细胞用阿氏液保存最多不要超过3周，且不应溶血。2．控制好反应温度、时间等条件对玫瑰花环形成率有较大影响。选37℃作用10min，低速离心5min，置4℃ 2h～4h，其结果稳定性较好，结合率较高。如在37℃作用时间较长，可见玫瑰花环发生变形，结合部位松弛、拉开，甚至解离。3．指示红血球的动物种类也与玫瑰花环的形成率有关。如马淋巴细胞与豚鼠红细胞结合较好，而驴则与绵羊红血球结合较好。Melinda氏报道，人、马、牛、猪、狗、猫、鼠与豚鼠红细胞的结合率都高于绵羊红细胞的结合率。4．加犊牛血清能增加玫瑰花环形成细胞的稳定性，增强与指示红细胞结合的牢固性。5．Hank’s液的pH以7.2～7.4为宜。
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