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管号 1 2 3 4 5 6 7 8 溶血素稀释倍数 10 102 103 2×103 3×103 4×103 5×103 1 ％红细胞量（ml） 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 溶血素量（ml） 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.9％盐水（ml） 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 混匀，37℃感作1h 结果判定 - - - - 3．补体 当日采集豚鼠混合血清，用Hank’s液稀释成1︰100，置4℃保存备用。4．无Ca2 、Mg2 pH7.2的Hank’s液5．姬姆萨染液6．1％戊二醛溶液操作方法1．分离淋巴细胞，制成约2.5×106个／ml悬液。2．EAC悬液的制备 取4％鸡红细胞2ml于试管中，加入1︰4 000的鸡溶血素2ml，混匀，置37℃水浴15min，取出后离心，用Hank’s液洗涤2次，再用Hank’s液恢复至4％红细胞2ml，加入等量的1︰100稀释补体，混匀，再放置37℃水浴15min取出，用Hank’s液洗涤2次，配成4％EAC细胞悬液。3．取淋巴细胞悬液0.2ml，加入4％EAC细胞悬液0.2ml，混匀，室温或20℃作用30min。1 000r/min离心5min，吸弃过多的上清液，放入4℃2h～4h。4．取出后，将沉淀轻轻摇起，加1％戊二醛0.1ml，混匀后置4℃固定30min。5．以悬液制片，自然干燥，滴加姬姆萨液染2min，加自来水继续放置15min，冲洗，将玻片置95％酒精缸脱色15sec~30sec（以脱成浅紫蓝色为度），再置盐酸液缸（按1％HCl 1份与自来水2份）脱色（呈淡兰略带红色为度）10sec左右，取出冲洗，干后镜检。结果判定 凡一个淋巴细胞结合3个以上鸡红细胞即为EAC花环形成阳性细胞。共计数200个淋巴细胞，计算花环形成率。注意事项1．加入淋巴细胞与鸡红细胞的比例一般以1︰40为宜（1︰30～1︰50），淋巴细胞过少，花环形成率明显减少。2．淋巴细胞、红细胞、补体均应新鲜，否则花环形成率明显下降。3．据认为小鼠补体比豚鼠补体更为好，小鼠血清中胶固素活化因子（KAF）含量较多，可使大部分C3裂解而不易引起溶血。
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