常用标记免疫酶及其底物

1．标记酶的选择条件⑴ 活性高，分解底物的能力强。⑵ 特异性强，即作用于底物的专一性强。⑶ 与抗原抗体结合后仍保持酶的活性。⑷ 与底物作用可以显色。⑸ 纯度高、易纯化，即含杂蛋白少。⑹ 可溶性(水溶性)好，在溶液中稳定。⑺ 测定方法简单。⑻ 酶来源方便、价格低廉。2．符合条件的酶⑴ 辣根过氧化物酶(Horseradish peroxidase HRP)，分子量40 000。⑵ 碱性磷酸酶（Alkaline phosphatase AKP），分子量82 000。⑶ β-半乳糖甙酶（β-galactosidase），分子量540 000。⑷ 葡萄糖氧化酶（glucose oxidase）,分子量186 000。其中以HRP最为常用，因其具有活力高、稳定、分子量小、易提纯等优点。3．辣根过氧化物酶 HRP广泛地分布于植物界，以辣根中含量最高。它是由无色的酶蛋白和棕色的铁卟啉辅基组成的一种糖蛋白，含糖量18%，它由300个氨基酸和4个二硫键连接而成。分子量40 000，等电点5.5～9.0之间，它催化的最适pH因供氢体不同而有所差异，但多在pH5.0左右。HRP易溶于水和58%以下的饱和硫酸铵溶液。HRP酶蛋白和其它杂蛋白的最大吸收光谱为275nm，辅基部分的最大吸收光谱为403nm，二者比值OD403/OD275为酶的纯度。以RZ值(Reinheit Zabl
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