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    常用标记免疫酶及其底物

    l德文)表示。RZ>3为高质量,RZ>2.5为中等质量,RZ<2.5则需要纯化。RZ值越小,表示杂蛋白越多,如RZ为0.6,则表示有75%的杂蛋白。衡量酶质量的标准有两条,一个是纯度即RZ值,一个是活力。只用酶的纯度表示是不全面的。目前国际上规定,酶的活力以国际单位表示。一个酶单位是在一定的条件下(pH、温度和底物浓度)一分钟能降解1mMol/L底物的酶活力。1mg酶所含有酶的单位数称为比活性。用比活性进行酶的比较。用作标记的过氧化物酶活性一般要大于250units/mg。4.HRP的作用底物与供氢体 底物为H2O2,催化时需供氢体。⑴ 组化法常用的供氢体是3,3′-二氨基联苯胺盐酸盐(3.3-diamino-benzidine . DAB)。其反应物由于形成的氧化型中间体迅速聚合,形成不溶性的棕色吩嗪衍生物,可用于光学显微镜观察。这种多聚物能还原和螯合四氧化锇(OSO4)形成具有电子密度的产物,可适用于电子显微镜观察。⑵ 用于ELISA的供氢体有下列数种。表 ELISA的供氢体 供 氢 体 反应颜色 波长 终止剂 终止 颜色 测定波长 联大茴香胺(OD) 桔红 512 5Mol/L HCI 黄 400 邻苯二胺(OPD) 黄 444 2Mol/L H2SO4 桔黄 492 邻苯甲苯胺(OT) 兰 636 2Mol/L H2SO4 黄 442 5-氨基水杨酸 褐 475 1Mol/L NaOH 褐 449 以OD和OPD最为常用。OPD有致癌作用,使用时需注意。5.碱性磷酸酶 可从小牛肠粘膜或大肠杆菌中提取。它是一种磷酸脂酶,其作用是催化磷酸-脂水解释放出无机磷酸而显色。或者通过水解产生的磷酸与钼酸反应生成磷钼酸,然后在还原剂作用下生成蓝色的产物进行测定。 
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