马传贫病毒单克隆抗体的制备

材料与方法1．抗原动物及免疫方法抗原为哈尔滨兽医研究所保存的马传贫病毒株培养物制备的可溶性抗原。免疫动物为6～8周龄的Balb/c鼠。初次免疫用含完全佐剂抗原0.2ml（病毒含量为1.0×108／ml制备的可溶性抗原）腹腔接种，经2周再次免疫接种，应用不完全佐剂抗原0.2ml腹腔接种，再经3周强化免疫，接种可溶性抗原0.3ml，3天后取脾脏。2．细胞培养 SP2/0鼠骨髓瘤胞株，培养液为含0.025Mol/L HEPES的RPMI－1640（pH7.3），另加新生牛血清15％NEAA液1％，丙酮酸钠（1.1％）和谷氨酰胺（2.92％）各1％，青链霉素（100U或µg/ml）1％，39℃CO2培养箱中孵育，CO2浓度为5％。3．细胞融合及克隆化取SP2/0鼠骨髓瘤细胞1.0×107/ml和脾细胞2.0×107个/ml，离心沉淀弃上清，然后向细胞沉淀中加入细胞融合剂0.7ml（50％PEG 4 000），按常规细胞融合程序进行。用HAT完全培养基做稀释，培养在事先加有饲养细胞的24孔细胞培养板中，经7天具有杂交瘤细胞增殖，形成有数十个细胞菌落。当对其培养上清液检查抗体为阳性时，以96孔培养板有限稀释法和钢杯法将细胞做克隆化培养和增殖，然后转入细胞培养瓶中进行常规传代培养。4．抗体检测及鉴定(1) ELISA法：HRP标记兔抗鼠
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