马传贫病毒单克隆抗体的制备

鼠Balb/c结合物（北京生物制品研究所购买），用MR580微量ELISA自动读数仪判读结果。(2) IF法：直接法用兔抗鼠Balb/c IgG荧光抗体诊断血清对杂交瘤细胞染色，对照用SP2/0细胞，间接法用感染马传贫病毒的驴胎皮肤细胞及其正常驴胎皮肤细胞分别载于涂片上丙酮固定后，加A4、A5及C4培养物上清液，置37℃30min，然后用PBS洗涤三次，再用兔抗鼠Balb/c IgG荧光抗体诊断血清，置37℃30min，PBS洗涤3次，荧光显微镜下观察，并用SP2/0细胞培养物上清做阴性对照。镜下细胞呈绿色荧光者判为阳性。(3) 琼脂免疫双扩散法(4) SDS—PAGE法(5) McAb的纯化，以杂交瘤细胞无血清培养液和腹水做SPA－Sepbarosecl－4B亲和层析。(6) 杂交瘤细胞染色体的检测(7) 中和试验和补体结合试验结果1．杂交瘤细胞的筛选融合后的细胞接种在24孔细胞培养板上，第7天融合细胞开始增殖，经ELISA和IF筛选，获得A4、A5及C4三个分泌马传贫病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株。2．马传贫杂交瘤细胞的染色体组型分析 SP2/0骨髓瘤细胞染色体数为72，Balb/c鼠脾细胞染色体数为40，杂交瘤细胞系A4为97.80±3.87；A5为 100.93±5.50；C4为98.10±4.47。3．马传贫杂交瘤细胞分泌抗体的动力学对A 4、A5 和C4三株杂交瘤细胞1~60代培养上清液进行了ELISA检测，A4、A5两株抗体分泌较为稳定，C4株的抗体分泌有逐渐减少的趋势。4．马传贫杂交瘤细胞分泌抗体的特异性以A 4、A5 和C4杂交瘤细胞培养液分别给Balb/c鼠腹腔接种后引起的腹水及该鼠的抗血清同马传贫病毒（辽系毒和黑系毒）。能感染马匹的乙脑病毒和同为逆转录病毒科的牛白血病病毒抗原进行ID、CF及ELISA检测，仅见同马传贫抗原呈阳性反应，其余皆阴性。
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