单克隆抗体技术：抗体检测

用检测抗体的方法从杂交细胞中筛选出生产指定抗体的杂交株是很重要的。检测抗体的方法很多，从沉淀反应到放射免疫测定。由于细胞培养液中的抗体浓度通常是很低的，而且传统的检测方法多是以多价抗原与多克隆抗血清相反应。杂交瘤产生的抗体则是单克隆的，所以并不是每项方法都能适用。一定要选择敏感的、快速的、一次又能检测多份样品的方法。常用的检测方法如下：１．试管溶血反应检测法（1）材料：①杂交瘤细胞，换液后至少两天才收取培养液；②绵羊红血球，洗涤三次后，配成1％悬液；③豚鼠补体，无菌采取补体，以pH7.2PBS稀释成20％溶液，分装小瓶，于﹣40℃保存。使用时以补体和压积红血球5:1（V/V）的量进行吸收，4℃30min，然后2 000r/min离心10min，去红血球，取上清液备用；④0.01Mol/L pH7.2PBS液。（2）操作方法：①在小试管中，加入0.1ml杂交瘤细胞用过的培养液，再加入0.1ml pH7.2的PBS液，然后倍比稀释至一定的稀释度；②加入0.1ml补体和1％绵羊红血球0.1ml，混匀后置37℃水浴1h；③观察结果，以绵羊红血球完全溶解的杂交瘤细胞培养液的最高稀释倍数为抗体的溶血效价。2．斑点检测法抗红血球表面的单克隆抗体与浇灌在琼脂板的红血球结合，进而结合补体，而发生溶血斑点，对着光源用肉眼即可判定。（1）材料：①绵羊红血球，处理同试管法，最后配成25％红血球悬
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