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悬液；②新鲜豚鼠血清（同试管法处理）；③琼脂糖，配成0.6％PBS液，水浴中溶化；④0.01Mol/L pH7.2PBS液；⑤兔抗羊红血球抗体。（2）操作方法：①将溶化的0.6％琼脂糖倒入一试管中，置45℃～48℃水浴中；②加0.1ml 25％红血球悬液，0.1ml豚鼠补体，迅速混匀，倾注一干净载玻片上；③ 凝固后，在凝胶表面固定区域滴加2ml待测样品，标准阳性血清和对照试液；④待溶液全部渗入凝胶后，置湿盘；⑤37℃温育1h～2h，观察并判定结果。强阳性（ ） 中等阳性（ ）弱阳性（ ） 阴性（﹣）必要时可置室温过夜，再判定一次。3．膜荧光检测法（1）材料：①培养液HEM或RPMI－1640；②荧光试剂：异硫氰酸荧光素（FITC）标记的抗小鼠免疫球蛋白；③50％甘油缓冲液：1份甘油加1份体积0.05Mol/L pH 7.2 PBS 液混合即成；④荧光显微镜、载玻片、盖玻片、吸管等。（2）操作方法：①用培养液洗涤二次细胞，悬浮成2.0×107／ml；②50µl细胞悬液加50μl培养上清液混合，置4℃30min，用培养液洗涤3次，1 000r/min离心；③以50µlFITC—抗小鼠免疫球蛋白重新悬浮压积细胞，水浴30min～60min；④用冷培养液洗3次细胞，重新悬浮；⑤取一滴细胞悬液滴在玻片上，复盖片，用甘油缓冲液封固，置荧光显微镜下观察。着色细胞也可以在固定后观察，一滴细胞悬液，涂片、风干，用95％酒精固定10min，固定后的载玻片用PBS洗涤，盖上盖玻片，进行观察。4．免疫球蛋白和亚类球蛋白的检测 以琼脂双扩散试验法进行，此法简单易操作，特异性好。注意必须将培养液浓缩10～50倍，否则做双向琼扩不出现沉淀线。其检测方法为：（1）制备各种兔抗小鼠IgG1~4、 IgM1~2、IgA1~2和K、λ抗血清,也可直接购买。（2）取5ml培养物的上清液缓慢加入0.5ml的饱和硫酸铵溶液，混匀，静置3h，离心沉淀，去上清，沉淀加0.05ml蒸馏水溶解。（3）制成1％琼脂糖凝胶板，打孔。中间孔加20μl浓缩上清液，周围孔加20µl特异性抗血清，以10μl正常小鼠血清作对照。也可以采用酶联免疫吸附试验、间接血凝试验以及放射免疫等方法检测。
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