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    转移电泳技术

    原理转移电泳是将经聚丙烯酰胺凝胶电泳分离出的蛋白质谱直接转移到硝酸纤维膜上,而形成固定相,并同时排除各种干扰物质,保持其天然构象和生物学活性,完成在凝胶中难以进行的各种生物试验。材料1.琼脂糖2.丙烯酰胺3.甲叉双丙烯酰胺4.十二烷基磺酸钠(SDS)5.硝酸纤维膜滤纸 孔径0.45μm6.琼脂糖凝胶电泳缓冲液 0.89mMol/L Tris—89mmol/L 硼酸—2.5mMol/L EDTA(pH8.3)。7.SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳缓冲液 0.05Mol/L Tris—0.384Mol/L 甘氨酸—0.1%SDS(pH8.3)。8.蛋白质转移电泳缓冲液 25mMol/L Tris—192mMol/L 甘氨酸—20%甲醇(pH8.3)。9.溴乙啶溶液 称取5mg溴乙啶,用无离子水溶解。定容到10ml,取1ml稀释到1 000ml,最终浓度为0.5ug/ml。10.考马斯亮兰R-250染色液 0.25%考马斯亮兰R-250-10%醋酸-45%甲醇。11.氨基黑染色液 在含10%醋酸的甲醇中加入氨基黑10B至饱和。12.垂直板型及水平板型凝胶电泳槽13.转移电泳槽14.直流稳压电源0V~800V,0mA~100mA 操作方法1.SDS—聚丙稀酰胺凝胶电泳(垂直板型)分离蛋白
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