高压电泳

原理同普通电泳。普通电泳的电压一般为2V/cm~20V/cm，电泳时间需1小时至数小时。电泳时间越长，扩散越严重。对于一些小分子的物质如核苷酸、氨基酸、多肽等，在常压电泳中，往往达不到分离的目的。高压电泳则能使分子量相近的物质充分地进行分离。在高压电泳中，电压可达到50V/cm～200V/cm，高压电源达1 500V～1 0000V，电流可达50mA～400mA.电压越高，分离时间越短，所以在高压电泳中，一般只需较短的时间,数十分钟，有的甚至数分钟即可达到分离的目的。高压电泳广泛地用于核苷、核苷酸、氨基酸、多肽、糖、生物碱、有机酸等的分离。高压电泳中最大的问题是冷却，常用的冷却方式有三种，即固体冷却、液体冷却和气体冷却。其中以液体冷却设备简单、效果也好。液体冷却剂的选择必须遵循以下几点：①与缓冲液互溶性小；②不溶解样品；易从纸上除去；不以*；蒸汽不是剧毒性物质。一般常用的冷却剂有甲苯、四氯化碳、液体石蜡、氯苯、正己烷、乙庚烷等。以甲苯冷却效率最高。材料与试剂1．0.05mol/L pH4.85柠檬酸缓冲液2．5－AMP、ADP、ATP，每种核苷酸溶液的浓度为5mg/ml。3．AMP－ADP－ATP混合液。取上述三种核苷酸溶液等体积混合而成。4．点样管、毛细管5．新华1号滤纸6．玻璃喷雾器7．高压电泳仪8．聚乙烯膜等操作方法1．剪纸剪适当大小滤纸，一般为60cm&time
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