酶标对流免疫电泳

原理利用酶标记抗原（抗体）和待测抗体（抗原）在电场中向一定方向移动，在比例适当的地方形成沉淀线，通过酶作用底物而显色，指示沉淀线的存在。该法的敏感性大大高于对流免疫电泳。本试验以检测血吸虫抗体为例。材料与试剂1．0.02Mol/pH 8.6巴比妥缓冲液巴比妥 0.553g巴比妥钠 3.503g乳酸钙 0.512gH2O 加至 1 000ml2．0.1Mol/L pH7.0PBS（0.14Mol/L Nacl）3．0.2Mol/L pH7.6硼酸缓冲液硼酸 10.510g硼砂 2.860gH2O 加至 1000ml操作方法1．酶标抗原的制备用1ml血吸虫卵抗原（蛋白含量为1.5mg/ml~2.0mg/ml）加入3mg~4mg辣根过氧化物酶（蛋白质：酶=1︰2），液体呈棕红色，然后在轻轻搅拌下，缓慢加入50μl 1％戊二醛，要求在5min~10min内滴加完毕。置20℃~25℃搅拌2h。装入透析袋，于1000ml、0.1Mol/L pH7.0PBS液4℃透析2天，并换液3次~4次。取出酶标记物加等量纯甘油，使含50％甘油试剂，即为酶标抗原。分装小瓶，存于-20℃中备用。2．琼脂凝胶板的制备取优质琼脂，以0.02Mol/L pH8.6巴比妥缓冲液制成1％琼脂，溶化后，置于玻片上，制成2mm厚的凝胶板。3．打孔加样打6对孔，抗原孔径为0.30cm，抗体孔为长方形0.2c
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