对流免疫电泳

原理在pH8.6的琼脂凝胶中，抗体球蛋白只带有微弱的负电荷，在电泳时，由于电渗作用的影响，抗体球蛋白不但不能抵抗电渗作用向正极移动，反而向负极倒退。而一般抗原蛋白质带负电荷，将抗原置于负极，将血清抗体置于正极，电泳后则在两孔之间相遇，并在比例适当的部位形成肉眼可见的沉淀线。本法由于抗原抗体分子在电场作用下定向运动，限制了自由扩散，增加了相应作用的抗原抗体的浓度，从而提高了敏感性，它较琼脂扩散敏感性高10～16倍。本法快速、操作简单。试剂同免疫电泳。操作方法1．制琼脂板以pH8.6离子强度0.05巴比妥缓冲液配成1%～1.5％琼脂凝胶板，厚度2mm～3mm。2．打孔琼脂冷却后，按图打孔，打成对的小孔数列，孔径0.3cm～0.6cm，孔距0.4cm～1.0cm。挑去孔内琼脂，封底。3．加样一对孔中，一孔加已知（或待测）抗原，另一孔加待测（或已知）抗体。4．电泳将抗原孔置于负极端。电压2.5V／cm～6V／cm，或电流强度3mA/cm～5mA/cm，电泳时间30min～90min。观察结果断电后，将玻板置于灯光下，衬以黑色背景观察。阳性者则在抗原抗体孔之间形成一条清楚致密的白色沉淀线。如沉淀线不清晰，可把琼脂板放在湿盒中37℃数小时或置电泳槽过夜再观察。注意事项1．抗原抗体浓度的比例当抗原抗体比例不适合时，均不能出现明显可见的沉淀线。所以除了应用高效价的血清外，每份待
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