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免疫电泳(Immunoelectrophoresis) |
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原理蛋白质是一种两性电解质,它同时具有游离氨基和羧基。每种蛋白质都有它自己的等电点。等电点的高低取决于蛋白质的性质,在等电点时,蛋白质所带的正负电荷相等。在pH大于等电点溶液中,羧基解离多,此时蛋白质带负电荷,带负电荷的蛋白质在电场中向正极移动。反之,在pH小于等电点的溶液中,氨基解离多,此时蛋白质带正电荷,在电场中向负极移动。这种带电质点在电场中向着带异相电荷的电场移动,称为电泳。带电质点所以能在电场中移动以及具有一定的移动速度,取决于其本身所带的电荷、电场强度、溶液的pH值、粘度以及电渗等因素。影响电泳的因素不同带电质点在同一电场中的迁移率(或泳动度)不同,影响迁移率的因素有:①带电质点的性质:即颗粒所带净电荷的量,颗粒大小及形状等。带电荷越多,分子越小,泳动速度越快;②电场强度:电场强度是单位厘米的电位差。电场强度越大,带电质点泳动速度越快。反之亦然;③溶液中pH值:溶液的pH值决定了带电质点的解离程度,也决定了物质所带电荷的多少。对蛋白质、氨基酸等两性电解质而言,pH值离等电点越远,颗粒所带的电荷越多,电泳速度也越快。反之则越慢。蛋白质在酸性溶液中易变性,在偏碱溶液中比较稳定,所以蛋白质电泳大多用pH8.2~8.8的巴比妥或硼酸缓冲液,在这种pH中,血清蛋白一般都带负电荷;④溶液的离子强度:溶液的离子强度越高,颗粒泳动速度越慢,反之越快。血清电泳一般最适宜离子强度在 < 1 > < 2 >
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