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免疫球蛋白提取 (Immunoglobulin isolation):Fab片段的制备 |
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利用胃蛋白酶分解IgG,将抗体断链为Fab和Fc片段。具体操作方法如下:1.将IgG粉末100mg,溶于2ml0.10Mol/L pH4.0醋酸缓冲液。溶液稍成白浊,30℃,保温10min。2.取结晶胃蛋白酶1.50mg,溶于1.50ml 0.10Mol/L pH4.0醋酸缓冲液,加入上述溶液中,于30℃作用16h。3.用0.10Mol/L pH8.0 PBS透析一夜。4.加入硫醇使成0.10mol/L,在室温下搅拌30min。5.加入1Mol/L的碘乙酰胺(Indoacetamide)使成为0.10Mol/L,室温下搅拌1h。6.用0.01Mol/L PBS 1 000ml透析过夜,3 000r/min,离心30min,去沉淀。7.以上清过SephadexG100(40cm×2.0cm)以0.10Mol/L PBS洗脱。8.以每管6ml收集,约在第8管开始,Fab片段被洗脱。9.测OD280nm,将Fab管合并,浓缩、冻干。10.如制备F(ab)2,上述4~6步骤则可以省略。 你还没注册?或者没有登录?
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