（一）材料及试剂1．器材⑴细胞培养板：灭菌的国产96孔或40孔平底聚苯乙烯塑料板或进口96孔细胞培养板。⑵50μl、100μl、300μl微量加样器，灭菌的塑料滴头。⑶无菌透明胶带，其密度与塑料板一致。⑷灭菌的离心管⑸倒置显微镜2．IBR Baitha—Nu/67弱毒株冻干毒，标准阳性血清，标准阴性血清，均由指定单位供应。3．细胞培养液Eagles MEM 45％0.5％水解乳蛋白－Earle液 45％犊牛血清 10％谷氨酰胺 0.03％青、链霉素各200μg/ml用7％NaHCO3液调pH6.8～7.0。（二）操作方法1．细胞制备 灭菌采取犊牛肾或睾丸，按常规胰蛋白酶消化法制备牛肾（BK）或睾丸（BT）细胞，置37℃温箱培养，长成良好单层细胞备用。一般使用次代细胞，但不超过4代。2．病毒抗原制备 将IBR Baitha—Nu/67弱毒株冻干毒用LE（0.5％水解乳蛋白—Earle液）作10倍稀释，取长成良好的单层细胞（BK或BT），用Earle’s液洗一次后，按原培养液1／10的量接毒。置37℃温箱吸附1h，然后加入pH7.1～7.2含青、链霉素200g/μgml的LE液至原培养液量，37℃培养，待80%～90％出现典型IBR病变时收获培养物，冻融2次后，3 000r/min离心10min，其上
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