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融合的方法很多，常用的有转动法和离心法。融合时脾细胞和骨髓瘤细胞的比例为1:1至10:1不等。3:1或5:1最为常用。1．试剂与材料(1) 供融合用的脾细胞及骨髓瘤细胞。(2) 1640培养液100ml。(3) 完全1640液100ml。(4) 2.5％FCS－1640液50ml。(5) HAT培养液100ml。(6) 50％PEG：取分子量4 000，高纯度的（日本进口或Serva）PEG10g放入25ml瓶中高压灭菌，使用前用预热于40℃的1640液10ml等量（W/V）混合，以酚红检查pH，一般不必调pH。如pH有改变，可用HCl或NaHCO3调整。(7) 10ml和50ml的灭菌沉淀管或瓶。(8) 40孔塑料培养盘。2．操作方法⑴ 准备好脾细胞。⑵ 在50ml沉淀管中混合108脾细胞和107小鼠骨髓瘤细胞，并加入50ml 2.5％FCS－1640液。⑶ 室温400g离心3min，使细胞沉淀。⑷ 移去上清液。⑸ 轻敲管底部，使沉淀流动，把沉淀管放于40℃水浴中，使其达融合温度。⑹ 加预热至40℃的50％PEG 0.8ml，用1ml吸管缓慢滴加，边加边摇沉淀管，肉眼观察可见有颗粒出现，滴加过程要求持续2min。⑺ 加1ml1640液，边加边摇动，持续1min。⑻重复⑺一次。⑼ 加1ml 1640液，边加边摇动，持续0.5min。⑽ 重复⑼一次。⑾ 加1640液15ml。
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