免疫细胞化学图像分析常用的测量参数

便于测量。彩色有两种情况：在屏幕上出现与标本一样的颜色称为真色（real color），如果将不同的灰度转换成不同的颜色则称为假色（pseudo color），应用假色的目的是增强对比度，来改善对细胞结构的视觉识别，同时可增强轮廓用来强调结构的细节　。例如，免疫细胞化学中常用的非标记抗体过氧化物酶—抗过氧化物酶法，最终反应产物呈棕色，假设在脑内某核团的许多细胞中，呈现出不同深度的棕色，深浅差别较大者显示在屏幕上人眼还能区别，若差别小的则不易区别了，操作者可将灰度11～15用红色显示，灰度16～20用蓝色显示、灰度21～25用-显示、灰度26～30用绿色显示等。一般可呈现数十种颜色。也可以将灰度11～20用深红色显示、灰度21～30用淡红色显示、灰度31～40用蓝色显示等，由操作者随心所欲加以编辑。这种图像如拍摄下来，旁边显示出一条彩色带，表明什么颜色代表什么范围的灰度，如此可将一种颜色的免疫细胞化学标本转换成多种彩色的，对比鲜明的照片。　　有些图像分析仪中带有光密度计组件，光密度计能将扫描器视频信号变换成对数等值，然后数值化，就能用绝对光密度单位来校正。因此，光密度计把被测物的积分光密度作为主要输出，所谓积分光密度即各个单独探测的像素密度分布的总和。因为容易得到被测物的面积，也就很容易求出平均密度。光密度在细胞化学反应的定量领域内极为有用。灰度是一种相对值，因为你可将标本上的灰度随你编辑分为64级、也可将其分为128级或者256组，而光密度是绝对值。在文献中光密度常用OD表示（optical density）。有的单位购置了图像分析仪后才发现不能作光密度测量，但已无法再去掉换，所以在购买前必须详细了解其性能，包括屏幕像素数、有无光密度计组件等。2、长度　　形状不规则的线形组织结构，一般方法很难计算出其长度，如组织中的毛细血管，神经纤维、细胞超微结构中的各种膜性结构等，以往常用排列稀疏或密度集等词描述，图像分析仪则可测出各种图像周界线的长度。例如：在活检组织的子宫颈上皮细胞的电子显微镜照片上，测出在一定范围的细胞膜长度为8128像素，桥粒长度为1229像素，计算出桥粒长度占细胞膜总长度的15%，wiernik等用此方法观察到癌细胞的桥粒值远小于正常细胞，提出这可能与癌细胞易于失去相互间的的细胞连接，从而形成转移有关。用免疫细胞化学法显示的神经纤维，在局部组织中可能出现纵横交错的复杂图像，用图像分析仪可获得单位面积内神经纤维的总长度。又如去甲肾上腺素神经纤维呈串珠样，如果测出一定范围内神经纤维总长度及局部膨大数目，即可计算出串珠平均间隔距离，比较精确。3、面积　　无论是在光镜或电镜免疫细胞化学标本的观察中，都要涉及有关标本中某些结构的面积问题。即使是极不规整的结构，用图像分析法容易算出其面积。在一定的放大倍数下，每μm2中含多少像素可以测出，画出待测结构的轮廓，在所勾画的范围内含多少像素是立即可显示出来的，这样，很快可算出面积的数值。例如免疫电镜技术中的铁蛋白法、胶体金法等，可用上述方法进行单位面积中反应产物颗粒的计数，可进行各种实验条件的比较。　　曾有人在肝脏切片上进行图像分析，在一定范围内所有细胞核的总面积显示为51554像素，其中肝细胞核总面积为27431像素，可知肝细胞核占全部细胞核总面积的53%。
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