荧光素标记抗体

(一)　原理　　目前用于抗体标记的荧光素主要有异硫氰酸荧光素(Fluorescein isothiocynate,FITC)或罗达明(Lissamine rhodamine B200, RB200)。在硷性条件下FITC的碳酰胺键可与抗体赖氨酸的ε氨基共价结合，标记后的抗体仍保持与相应抗原结合的能力。在荧光灯源紫外线或兰紫光激发下产生黄绿色荧光，通过在荧光显微镜下观察或流式细胞仪分析可对相应抗原进行定性、定位或定量的检测。　　(二)　操作步骤　　　　将纯化的IgG抗体对PH9～9.5碳酸盐缓冲液透析过夜，　　　　透析后抗体液移入小烧杯中　　　　　　　　　　　　　　↓　　　　称取适量IFTC，加入二甲亚砜(DMSO)(FITC～1mg/1ml DMSO)　　　　使终浓度为1mgFITC／1mlDMSO　　　　FITC／IgG比例:如IgG浓度为1mg／ml，FITC／IgG比例约为50μgFITC／mgIgG；　　　　如IgG为5～10mg／ml，则比例为25μgFITC／ml IgG　　　　在10ml小烧杯中先放入抗体　　　　　　　　　　　　　　↓　　　　按上述比例将FITC-DMSO溶液逐滴加入透析后的抗体溶液中　　　　　　　　　　　↓　　　　将标记物用PBS加至2.5ml，磁力搅拌器室温下避光搅拌2h　　　　　
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