荧光素标记抗体

　　　　　　　↓　　　　用PD10柱(Sephadex G25柱)除去游离荧光素，先用25ml PBS淋洗G25柱　　　　　　　　　　　↓　　　　收集PBS洗脱第一个荧光素结合蛋白峰，测定F／P　　　　比值。第二个荧光素峰为游离荧光素　　　　计算:　　　　　　　　　2.87×A495　　　　F／P＝────────　　　　　　　　A280-0.35×A495　　　　合适的F／P值为2～4。　　(三)　试剂器材　　1.　纯化的多克隆抗体或单克隆抗体。　　2.　FITC(Fluorescein-5-Lsothiocyanalte)或其它荧光色素。　　3.　PBS、DMSO　　4.　PH9～9.5碳酸盐缓冲液: Na2CO34.3g，NaHCO3 8.6g加蒸馏水至500ml。　　5.　PD10柱(Sephadex G25柱)　　6.　磁力搅拌器，紫外分光光度计等　　(四)　注意事项　　1.　FITC保存于4℃暗处，使用前待试剂瓶升至室温时开盖称取，以避免潮解。　　2.　FITC-DMSO液要临用时配制。　　3.　碳酸盐缓冲液要新鲜配制。
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