戊二醛二步法制备HRP结合物

。最后以直接ELISA法(或在正式实验系统里)对酶结合物进行滴定( 见本节 (三)工作浓度的选择)。　　(2)　定量和克分子比值测定：可用分光光度计测定(光程1cm)。　　酶量(mg／ml)＝OD403nm×0.4　　IgG量(mg／ml)＝OD280nm-OD403nm×0.42)×0.94×0.62　　　　　　　　　酶量(mg／ml)　　 IgG量(mg／ml) 　　酶量　　克分子比值＝──────── ÷ ─────── ＝ ─── × 4　　　　　　　　　　40,000 　　　　　　160,000　　　IgG量　　　(3)　本法标记步骤比较简单，重复性好。缺点是酶的利用率低，一般只有2～4％的酶与蛋白质结合。　　4.　试剂及器材：　　(1)　0.1M PH6.8磷酸缓冲盐水(PBS)：取0.2M Na2HPO4 49ml, 0.2M NaH2PO4 51ml，NaCl1.8克，加蒸馏水至200ml。　　(2)　1.25％戊二醛液：取25％戊二醛50ml与PH6.8的PBS1ml混合。　　(3)　1M PH9.5碳酸盐缓冲液：取1M碳酸钠3ml与1M碳酸氢钠7ml混合。　　(4)　0.2M赖氨酸溶液：称赖氨酸29.2mg溶于0.01M PH9.5碳酸缓冲液1ml中。　　(5)　0.15M PH7.4 PBS及生理盐水。　　(6)　PH7.8饱和硫酸铵溶液及半饱和硫酸铵溶液。　　(7)　萘氏试剂及聚乙二醇(PEG，MW2000)。　　(8)　纯化的特异性抗体或抗Ig抗体。　　(9)　HRP(RZ>3.0)。　　(10) Sephadex G-25层析柱(2cm×50cm)。　　(11) 搅拌器，分光光度计，离心机。　　(12) 透析袋，大、小烧杯，试管，吸管等。
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