琼脂免疫扩散试验

（一）材料与试剂1．琼脂粉2．平皿3．打孔器4．生理盐水或其他缓冲液，可加1/万的硫柳汞或叠氮钠防腐。（二）操作方法1．称取一定量的琼脂粉，按1%左右（0.8％～1.5%）的比例加入生理盐水或缓冲液，水浴煮沸融化20min。2．将融化的琼脂倒入平皿内，使厚度2mm～3mm。自然冷却。3．根据要求（孔径即孔的直径，孔距即两孔圆心之间的距离，包括两孔的半径）按模板打孔。也可直接用组合打孔器打孔。现在一般多打成梅花形孔图。4．挑出孔内琼脂，注意不要挑破孔缘。5．在火焰上缓缓加热，使孔底边缘的琼脂少许熔化，以封底，以免加样后液体从孔底渗漏。6．以毛细滴管吸取样品加入孔内，注意不要产生气泡，以加满为度。加少了，影响反应程度，加多了，易溢出，也影响反应结果。7．加毕后，盖上平皿盖，将平皿翻过来，置湿盘中，37℃自由扩散24h～48h。（三）结果判定1．用以检测抗原或比较抗原差异时，将抗血清置中心孔，将待测抗原或需比较的抗原置于周围相邻孔。若出现沉淀带完全融合，证明为同种抗原；若二者有部分相连，表明二者有共同抗原决定簇；若二条沉淀线相互交叉，说明二者抗原完全不同，见下图。图3-1 琼脂免疫扩散试验结果示意图中间孔含A,B,C三种抗血清，a、b和a、c为不同型的抗原（呈双线或交叉），b、c为同一血清型的不同亚型（部分融合，有交叉）2．用做血清流行病学调查时，将标准抗原置中心孔，周围1、3、
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