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    Dot-IGSS检测牛结核血清抗体

    (一)材料与试剂1.抗原 牛结核PPD。2.血清 待检血清、标准结核阳性血清和结核阴性血清。3.硝酸纤维膜 孔径0.45µm。4.氯化金(优质)5.0.2Mol/L PB液6.0.05Mol/L Tris—HCl缓冲液7.硝酸银显影液(现用现配)明胶(20g/L) 6.00ml对苯二酚(57.90g/L) 3.00ml硝酸银(25g/L) 0.20mlpH3.5柠檬酸盐缓冲液 1.00ml对苯二酚和硝酸银溶液需避光保存,临用前将明胶加热溶解后,按上述比例依次混合。pH3.5柠檬酸盐缓冲液的配制:柠檬酸(C6H8O7·H2O) 25.50g柠檬酸三钠(C6H5Na3·2H2O) 3.50g去离子水 加至 100.00ml溶解后即可使用。8.定影液硫代硫酸钠(Na2S2O3) 20.0g去离子水 加至 100.00ml溶解即可。9.兔抗牛IgG抗体。(二)操作方法1.胶体金的制备 试验用水均要求三蒸馏水并过去离子柱,最终去离子水的电阻大于100万Ω。所有容器最终均用去离子水清洗。(1)采用鞣酸—枸橼酸钠还原法制备A液 1%HAuCl4 2.00ml去离子水 158.00mlB液 1%枸橼酸钠 8.00ml0.1%Mol/L K2CO3 0.20ml1%鞣酸 0.20ml去离子水 31.60ml将A液和B
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