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    铁蛋白免疫电镜操作步骤

    1.铁蛋白的提取⑴ 配制2%硫酸铵液,并以1Mol/L的NaOH或HCl调pH值,正好为5.85。取1g铁蛋白溶于100ml的2%硫酸铵液中。⑵ 加入20%硫酸镉,使最终浓度为5%,混匀,4℃过夜。⑶ 1 500g离心(4℃)2h,去上清。仍加2%硫酸铵至100ml,混匀,离心,去除不纯沉渣。⑷ 于上清液中重新加入20%硫酸镉,重复步骤⑵,离心,去上清。⑸ 检查沉渣,置显微镜下检查,应具有典型的黄褐色结晶,结晶为六角形,双一四点结构,如结晶不典型,应继续重复以上步骤。⑹ 以少量的蒸馏水溶解,再加50%饱和硫酸铵溶液,使之沉淀,离心,去上清。⑺ 重复步骤⑹一次。⑻ 以少量蒸馏水溶解,常水透析24h后,以0.05Mol/L pH 7.5PBS透析24h。⑼ 100 000r/min离心2h,去除上部无色上清液(约3/4总量),置4℃过夜。⑽ 用微孔滤膜(孔径0.45μ)过滤,使铁蛋白含量为65mg/ml~75mg/ml,分装,4℃保存不要冻干保存,以免铁蛋白结构遭破坏。2.铁蛋白-抗体交联法⑴ 以0.3Mol/L pH 9.5硼酸盐缓冲液将铁蛋白稀释成20mg/ml~25mg/ml。⑵ 以1︰1000(W/W)的比例加入XC液室温搅拌45min,离心去沉淀。⑶ 以0.3Mol/L pH 9.5硼酸盐缓冲液将提纯lgG配成5mg/ml,以1︰4的比例(V/V)加入IgG与铁
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