铁蛋白免疫电镜操作步骤

铁蛋白－XC液，4℃搅拌48h。⑷ 以0.1Mol/L碳酸铵溶液透析过夜，以除去多余的异氰酸盐，再以0.05Mol/l pH 7.5 PBS透析，使pH值恢复到生理水平。⑸ 超速离心以1.00×105g离心5h，去上清，沉淀以0.05Mol/L PBS悬浮，再次离心，以除去未结合的IgG。⑹ 以血清学及免疫学方法测定结合抗体的特异性、免疫活性以及标记效应，如果操作步骤严格，结果是满意的。3．铁蛋白－抗体结合物处理标本（1）将标本以5%福尔马林pH 7.2(4℃)PBS液固定40min～60min。（2）用冷的PBS液洗涤，离心。（3）如是组织块，则在解剖显微镜下切成更小块，放入试管中，加入铁蛋白－抗体结合物置室温20min，不时振荡,（4）以冷PBS液洗涤三次，离心。（5）沉淀以2.5%戊二醛固定20min，以PBS洗涤。（6）再以锇酸固定，脱水包埋。也可以先超薄切片，再进行铁蛋白－抗体结合物染色。操作如下：⑴ 将培养细胞以1%福尔马林PBS液固定(4℃)。⑵ PBS液洗涤离心。⑶ 以0.5ml,30%牛血清蛋白PBS液悬浮置入胶透析膜袋中，再将袋置于吸水剂粉末上，待牛血清白蛋白成胶状物时，将透析袋移至2%戊二醛PBS液（pH7.5）中固定3h。⑷ 取出，切成小块，以PBS液洗涤。⑸ 置干燥器中以硅胶干燥。⑹ 包埋、切片、在水上收集切片置于经4%牛血清白蛋白PBS液处理的披有胶膜的载网上(牛血清白蛋白的处理在于减少铁蛋白结合物非特异性吸附于载网上)。⑺ 滴一滴铁蛋白－抗体结合物于载网上。⑻ 5min后，浮网于PBS液面,标本面向下，以除去多余的结合物。⑼ 凉干后，滴一滴乙酸双氧铀或氢氧化铅以复染。⑽ 水洗、晾干、电镜观察。
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