非同位素原位杂交组化与免疫组化联合法

　　（1）将切片漂浮于能经受高压灭菌的器皿中。0.1mol/l PBS pH7.2冲洗3×5min。　　（2）0.1mol/L甘氨酸PBS冲洗5min。　　（3）0.4% Triton X-100 PBS 15min。　　（4）1μg./ml蛋白酶K（0.1mol/l Tris –HCl pH8.0, 50mmol/L EDTA 配），37℃保温30min。　　（5）4%多聚甲醛PBs 5min。　　（6）PBS冲洗2×min。　　（7）0.25%乙酸酐（0.1mol/L三乙醇胺配）10min。　　（8）2×SSC冲洗10min。　　（9）将切片用灭菌吸水纸吸干，然后入杂交液。核酸探针浓度为0.25～0.5μg./ml。每一正常成年大鼠脑冠状切片15μl杂交液足够。43℃保温12～16h。　　（10）4×SSc 37℃冲洗30min。　　（11）2×SSC（含RNasea 20μg/ml）37℃保温30min。　　（12）1×SSC和0.5×SSc 37℃分别冲洗30min。　　（13）0.05mol/l PBS冲洗3×5min。　　（14）0.5%H2O2 PBS室温20min。　　（15）0.05mol/l PBS 冲洗2×5m
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