非同位素原位杂交组化与免疫组化联合法

min。　　（16）碱性磷酸酶标记抗地高辛抗体（Fab）与抗蛋白或多肽等抗体混合液，前者一般1：1000稀释，后者则因抗体而异。稀释液：1%BSA，0.4%Triton X-100 ,0.05mol/L PBS pH7.2，4℃孵育24h。　　（17）0.05mol/l PBS冲洗4×5min。　　（18）二抗（1：100～1：200）37℃保温1h。　　（19）0.05mol/l PBS冲洗3×5min。　　（20）PAP（1：200～1：400）37℃保温1h。　　（21）0.05mol/l PBS冲洗3×5min。　　（22）DAB显色液（0.05贐 0.03% H2O2,0.05mol/L PBS pH7.2配）显色5～10min。　　（23）0.05mol/l PBS冲洗3×5min。　　（24）TSM，冲洗2×5min（TSM1：0.1mol/l Tris – HCl pH8.0,0.1mol/L NaCl,0.01mol/L MgCl2）.　　（25）硝基四氮唑蓝（400μg/ml）和5-溴-4-3-吲哚磷酸（200μg/ml）混合液（TSM2配显色混合液）显色1～3h，避光。　　（26）20mmol/l EDTA终止显色。　　（27）将切片贴于涂有铬矾明胶的载片上，空气干燥。　　（28）梯度酒精脱水，透明、封片。
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