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（1）切片入PBS冲洗5min，最好是将切片漂洗于灭菌器皿中。 （2）0.1mol/L 甘氨酸PBs 5min。 （3）0.4%Triton X-100 PBS 15min。 （4）1μg/ml蛋白酶K，37℃保温30min。 （5）4%多聚甲醛PBS固定5min 。 （6）PBS冲洗2×3min。 （7）0.25%乙酸酐（0.1mol/L 三乙醇胺配）10min。 （8）2×SSC冲洗10min。 （9）杂交：如是cDNA探针用前需进行变性处理，载片法时将切片在空气中晾干，加含探针的杂交液10μl于切片上，盖上22×22mm的硅化盖片或相当大小看蜡膜，3H标记探针每10μl杂交液含1×105cpm探针，32P或35S标记探针每10μl杂交液含5×105cpm探针；如是漂浮切片，则用灭菌吸水纸将切片水份尽量吸干，然后入杂交液，探针浓度和载片法一样。入杂交液后43℃保温12～16h。 （10）4×SSc 37℃冲洗10～30min。 （11）2×SSC（如为RNA探针则含20μg/ml RNase）37℃冲洗30min。 （12）1×SSC和0.1×SSc 37℃分别冲洗30min。 （13）PBS冲洗2&tim
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