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    同位素原位杂交组化与免疫组化PAP法的联合程序

    mes;5min。(转录ISHH)  (14)0.5%H2O2 PBS室温30min。  (15)1%BSA 37℃,30min 。  (16)第一抗体,4℃孵育16~24h。  (17)PBS冲洗4×5min。  (18)第二抗体37℃,1h。  (19)PBS冲洗3×5min。  (20)兔PAp 37℃,1h 。  (21)PBS冲洗3×5min。  (22)DAB显色液5~10min(DAB显色液:0.05贐 0.03% H2O2 PBS液配)。  (23)PBS冲洗3×5min。如是漂浮切片则将其贴于涂有粘附剂的载片上,晾干。  (24)切片入70%,85%,95%和2个100%酒精脱水,空气干燥。  (25)在暗室涂布乳胶(乳胶配制:乳胶原液:0.6mol/L醋酸胺=1:1),晾干,装入自显影暗盒。  (26)4℃曝光:3H标记探针4~8周,35S标记探针1~4周,32P标记探针7~10天。  (27)D196显影液,20℃显影5~10min。  (28)自来水冲洗数秒。  (29)F5坚膜定影液10min。  (30)自来水冲洗15min。  (31)切片温箱烤干,脱水,透明,封片。
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