溶血空斑形成试验

溶血空斑形成试验是一种体外检测单个抗体形成细胞(浆细胞)的方法，故又称体外抗体形成细胞(Plaque Forming Cell, PFC)测定技术。此项技术不仅可以作为免疫基本理论研究的有力工具，广泛地用于检测产生IgM类型(包括其它各类免疫球蛋白及其亚类)的抗体形成细胞，它还可作为临床筛选抗肿瘤新药以及研究中药对抗体免疫功能影响的免疫学指标。一、原理：　　溶血空斑形成试验的基本原理是将经绵羊红细胞免疫小鼠的脾细胞与一定量的绵羊红细胞混合，在补体参与下，使抗体形成细胞周围那些受到抗体分子致敏的绵羊红细胞溶解，形成肉眼可见的溶血空斑。根据所操作的方法不同可分为直接溶血空斑试验，间接溶血空斑试验，琼脂固相法，小室液相法，单细胞层法等等。下面介绍直接溶血空斑形成试验。二、操作步骤：　　1. 底层琼脂平皿的制备：将1.4％琼脂加热融化后倾注于平皿内，每个平皿6ml，凝固后置湿盒37℃备用。2. 0.7％琼脂加热融化后加入华氏管内，每管2ml，47～49℃水浴保温备用。　　3. 免疫小鼠脾细胞悬液制备：用4×10３个绵羊红细胞(SRBC)盐水悬液腹腔免疫小鼠，对照为等量生理盐水。4天后，小鼠拉脱颈椎处死，取出脾脏，用RPMI164。洗一次后置平皿中不锈钢筛网上,用注射器针芯研磨成悬液,洗涤两次,调整细胞数为3～8×10６/ml。台盼兰染色查活细胞数应大于90
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