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0％。置4℃冰箱备用。 4. 试验平皿的制备：依次将预温40℃左右的25％SRBC、牼-SRBC吸收的灭活胎牛血清以及保存于4℃的脾细胞悬液各0.1ml加入预热47～49℃的含0.7％琼脂的华氏管中，迅速混匀，立即倾注于铺有底层琼脂的平皿内，凝固后，置37℃孵育1小时。5. 加入1∶5～1∶10稀释的新鲜豚鼠血清0.5～1.0ml，使其均匀覆盖表面,再次置37℃温育30分钟，即可用肉眼或借助于放大镜进行空斑计数。三、试剂和器材 ㈠ 试剂 1. 1.4％琼脂：用pH7.4PBS配制。 2. 0.7％琼脂：用pH7.4PBS配制3. 25％SRBC盐水悬液4. RPMI16405. 胎牛血清，56℃30分钟灭活，并经SRBC吸收 6. 补体：新鲜豚鼠血清，用前经SRBC吸收后，用RPMI1640稀释。 ㈡ 器材：玻璃平皿7×1.5cm，三角烧瓶，水浴箱(47～49℃)，华氏管，1ml注射器，不锈钢筛网，青霉素瓶，离心管，不同规格加样器等。四、注意事项： 1. 0.7％琼脂必须置47～49℃水浴融态保温。如温度过高会导致SRBC溶血或所加入脾细胞的死亡。温度过低则在操作过程中琼脂发生凝固，影响上层琼脂平板的制备2. 离体的脾细胞应置4℃冰箱保存，防止抗体分泌和细胞死亡。 3. 在制备试验平皿时，对于所有玻璃器皿和各种试剂，均需预温，牭1各种试剂加入华氏管后，应与0.7％琼脂迅速充分混匀，然后立即倾倒于底层琼脂上，并避免倾入气泡。 4. 加入的补体应均匀覆盖于表层琼脂上。 5. 制备底层平皿和试验平皿时，均须将平皿置于水平台上，以保证琼脂面铺平。
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