铁蛋白免疫电镜技术

（一）原理免疫铁蛋白技术是以铁蛋白标记抗体，再以铁蛋白抗体与待检抗原作用。通过电镜检查，观察到铁蛋白抗体所在的位置，即抗原所在。（二）材料与试剂1．马脾铁蛋白2．硫酸铵3．硫酸镉4．双异氰酸镉二甲苯(Metaxylene dlisocyante XC)以0.30Mol/L pH 9.5硼酸盐缓冲液将XC配制成1%溶液。注意配制的水及容器必须特别清洁，配制后放置4℃数天，以不出现沉淀为准。如出现沉淀XC的多聚体形成，应重配。5．0.30Mol/L pH 9.5硼盐酸缓冲液6．0.1Mol/L硫酸铵液7．0.05Mol/L pH 7.4 PBS液（三）操作方法1．铁蛋白的提取⑴ 配制2%硫酸铵液，并以1Mol/L的NaOH或HCl调pH值，正好为5.85。取1g铁蛋白溶于100ml的2%硫酸铵液中。⑵ 加入20%硫酸镉，使最终浓度为5%，混匀，4℃过夜。⑶ 1 500g离心(4℃)2h，去上清。仍加2%硫酸铵至100ml，混匀，离心，去除不纯沉渣。⑷ 于上清液中重新加入20%硫酸镉，重复步骤⑵，离心，去上清。⑸ 检查沉渣，置显微镜下检查，应具有典型的黄褐色结晶，结晶为六角形，双一四点结构，如结晶不典型，应继续重复以上步骤。⑹ 以少量的蒸馏水溶解，再加50%饱和硫酸铵溶液，使之沉淀，离心，去上清。⑺ 重复步骤⑹一次。⑻ 以少量蒸馏水溶解,常水透析24h后,以0.05Mol/L
< 1 > < 2 >

设为首页 | 加入收藏 | 广告服务 | 友情链接 | 版权申明